© П.В. Сычев, Ю.Д. Удалов, Е.В. Маякова, О.Е. Клементьева, 2024
УДК 615.277.3:616-006.38:616-092.9
П.В. Сычев1, Ю.Д. Удалов1, Е.В. Маякова1, О.Е. Клементьева2
1ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр медицинской радиологии и онкологии» ФМБА, г. Димитровград
2ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им Н.Н. Блохина» МЗ РФ, г. Москва
Сычев Петр Владимирович ― начальник центра ядерной медицины, врач-радиолог ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр медицинской радиологии и онкологии» ФМБА
433507, г. Димитровград, ул. Курчатова, д. 5в, тел. +7-910-219-12-33, e-mail: sychevpetr@gmail.com, SPIN-код: 1612-7320, ORCID ID: 0000-0003-3965-4661
Реферат. С каждым годом количество больных с диагнозом злокачественного новообразования растет и, вместе с этим, увеличивается число пациентов, нуждающихся именно в паллиативном лечении. Метастатическое поражение костей ― одно из самых распространенных проявлений прогрессирования онкологического заболевания. Проблема терапии костных метастазов у пациентов с онкологическими заболеваниями остается актуальной и привлекает внимание онкологов разных специальностей.
В настоящий момент в РФ зарегистрирован зарубежный препарат для использования у пациентов с кастрационно-резистентным раком предстательной железы с костными метастазами при отсутствии висцеральных метастазов, однако с учетом тропности Радия-223 хлорида к костной ткани открывается широкий спектр возможностей для расширения клинического применения Радия-223 хлорида.
Основной целью доклинического исследования является подтверждение или опровержение гипотезы о достаточности клинически рекомендованной дозировки РФЛП на основе радия хлорида [223Ra] для достижения эффективного воздействия на культуры клеток опухолей, наиболее часто метастазирующих в костную ткань.
Методом выбора в дизайне доклинического исследования является количественная и качественная оценка радиобиологических аспектов действия альфа-излучения радия-223 на опухолевые клетки в условиях in vitro.
Результаты изучения фармакокинетических и дозиметрических характеристик отечественного радиофармацевтического лекарственного препарата на основе Радия-223 хлорида позволят совершенствовать методики лечения онкологических заболеваний и расширить направления клинического применения.
Ключевые слова: радия хлорид 223Ra, радиофармацевтический лекарственный препарат, дизайн доклинического исследования, in vitro исследования.
Введение
Метастазы в кости ― частое осложнение онкологических заболеваний, причем на долю рака молочной железы, простаты, легких, щитовидной железы и почек приходится почти 80% случаев костных метастазов [1]. Примерно у 20% раковых больных обнаруживают метастазы в костях в течение болезни, тогда как у 50% признаки метастатического заболевания обнаруживаются при вскрытии. Примечательно, что среди пациентов с метастатическим раком молочной железы частота встречаемости костных метастазов может достигать 85%, при этом в 60-75% случаев метастатическая болезнь первоначально проявляется в костях [2].
В 2013 г. FDA и EMA одобрили внутривенное введение 223Ra-Cl2 для лечения боли в костях, вызванной костными метастазами. В настоящее время применение 223Ra-Cl2 по назначению ограничено пациентами с кастрат-резистентным раком предстательной железы с симптоматическими костными метастазами без известных висцеральных метастазов [3].
Этот радиофармацевтический препарат включен в клинические рекомендации Европейской ассоциации ядерной медицины по паллиативной радионуклидной терапии [4].
В России РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] был зарегистрирован в 2016 г. (регистрационное удостоверение ЛП-004060, держатель РУ Байер Фарма, Германия) срок действия которого истек в 2021 г. В настоящее время регистрационное удостоверение переоформлено до 2025 г. В Российской Федерации имеются рекомендации по клиническому применению у больных с мКРРПЖ [5].
Эффективность лечения пациентов мКРРПЖ доказана в ходе международного клинического исследования фазы III для оценки эффективности и безопасности дихлорида радия-223 у пациентов с гормонорезистентным раком простаты и скелетными метастазами ALSYMPCA (ALpharadin in SYMPtomatic Prostate CCancer) [6] и уже не подвергается сомнению [7-9]. Несмотря на это, представления о механизме действия РФЛП на основе радия хлорида [233Ra], убедительно обосновывающего ограничение применения только костными метастазами рака предстательной железы, до сих пор не сложилось. В пользу того, что он может эффективно действовать и на костные метастазы злокачественных новообразований, отличных от рака предстательной железы, говорят следующие общепринятые аргументы:
― Основным механизмом действия данного радиофармацевтического лекарственного препарата, является повреждение ДНК опухолевых клеток α-частицами с ультракоротким пробегом (<100 нм) и высоким значением ЛПЭ энергии (80 кэВ/мкм) [10]. Это утверждение исчерпывающе описывает непосредственное действие хлорида радия-223 на культуры опухолевых клеток, остеокластов и остеобластов [11].
― В условиях целостного организма накопление и селективность радия-223 опосредованы как активным, так и пассивным компонентами. Остеобласты активно включают радий-223 в костный матрикс. Пассивное связывание радия-223 с гидроксиапатитом через анионный обмен с кальцием также вносит определенный вклад в его накопление [12-13].
― Процесс и уровень накопления РФЛП хлорид радия [233Ra] в костной ткани, прилежащей к очагу костного метастазирования не регулируются гистологическим типом опухоли, сформировавшей метастаз.
В развитие высказанного предположения о возможном расширении показаний к применению радия хлорида [223Ra] возникает гипотеза ― будет ли он в диапазоне разрешенных дозировок также эффективен в случаях костного метастазирования злокачественных новообразований отличных от рака предстательной железы?
Для подтверждения или опровержения выдвинутой гипотезы необходимо изучить действие РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] на различные опухолевые клетки, способные образовывать костные метастазы. Полученные экспериментальные данные, подтверждающие выдвинутую гипотезу, будут являться аргументом в пользу возможности расширения показаний к медицинскому применению РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] при метастатическом поражении костей злокачественных нозологий, отличных от РПЖ.
В данном случае достаточно доклинического изучения действия радиофармацевтического лекарственного препарата на культуры опухолевых клеток in vitro в диапазоне доз, сопоставимых с разрешенными для клинического применения дозировками.
Так как универсального дизайна подобных доклинических исследований радиофармацевтических лекарственных препаратов не существует, его разработка является актуальной задачей.
Материал и методы
Дизайн исследования разработан с целью доклинического изучения в условиях in vitro цитотоксического и антипролиферативного действия РФЛП на основе радия хлорида [223Ra] на двумерные несинхронизированные монокультуры коллекционных штаммов клеток опухолей, наиболее часто метастазирующих в костную ткань.
Основной целью доклинического исследования является подтверждение или опровержение гипотезы о достаточности клинически рекомендованной дозировки РФЛП на основе радия хлорида [223Ra] для достижения эффективного воздействия на культуры клеток опухолей, наиболее часто метастазирующих в костную ткань.
Методом выбора в дизайне доклинического исследования является количественная и качественная оценка радиобиологических аспектов действия альфа-излучения радия-223 на опухолевые клетки в условиях in vitro.
Разработка оригинального дизайна доклинического исследования проведена на основе анализа публикаций в рецензируемых научных журналах и собственного предшествующего опыта аналогичных экспериментальных исследований.
Концептуальная схема разработки дизайна представлена на рисунке 1.
Рис. 1. Концептуальная схема разработки дизайна ДКИ
Fig. 1. Conceptual diagram of the development of the DCI design
Обоснование выбора и расчет изучаемых дозировок
Выбор и расчет диапазона изучаемых дозировок был выполнен так, чтобы действующая на культуру клеток радиоактивность радия-223 могла быть соотнесена с применяемыми в клинических условиях дозировками РФЛП.
Расчет диапазона дозировок РФЛП для in vitro экспериментов проведен на основании данных о фармакокинетике разовых доз радия-223 дихлорида у пациентов в возрасте 65-79 лет с костными метастазами аденокарциномы предстательной железы. Фармакокинетические данные получены в ходе I фазы открытого нерандомизированного клинического исследования (идентификационный номер NCT01565746), выполненного в трех исследовательских центрах Японии. Накопление РФЛП в костной ткани пациентов оценивали методом непрямой радиометрии и представлены в виде доли препарата, накопленного во всей костной массе [14]. Для расчета диапазона исследуемых по разработанному дизайну ДКИ доз выполнены оценочные вычисления активности, в виде процента от введенной активности, нормированного на грамм костной ткани. Значение средней массы скелета людей той же национальности, пола и возраста, что и у принимавших участие в клиническом исследовании, получено из публикации [15].
Обоснование выбора тест-систем
Выбор in vitro тест-систем основан на частоте метастазирования первичных опухолей в кости, сопоставимых размерах изолированной клетки, продолжительности клеточного цикла и эффективности культивирования. Также при принятии решения была принята во внимание доступность коллекционных клеточных линий и способность к метастазированию в моделях in vivo.
Методы изучения и критерии оценки полученных результатов
Методы изучения и оценки цитотоксического и антипролиферативного действия РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] являются авторской адаптацией стандартных методик [16-19], апробированной при доклинических исследованиях РФЛП [20, 21].
Критерием оценки эффективности воздействия РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] является степень качественного и количественного проявления радиационно-индуцированной избирательной цитотоксичности и антипролиферативного действия.
Результаты и обсуждение
Теоретическое обоснование выдвинутой гипотезы
В пользу состоятельности выдвинутой гипотезы говорят следующие факты:
― хлорид радия [223Ra], как химический аналог ионов кальция, проявляет остеотропные свойства, но обладает тумороспецифичностью в отношении опухолевых клеток, формирующих костный метастаз [22, 23];
― изучение биораспределения радия хлорида [223Ra] у мышей с моделями остеобластического (LNCaP) и остеолитического (PC364) костных метастазов рака простаты человека показало, что препарат депонируется на поверхности кости, не накапливаясь в опухолевой массе [24];
― накопление РФЛП в скелете зависит от плотности местных кровеносных сосудов и не зависит от природы (бластическое или литическое) метастатического поражения [24]. РФЛП на основе хлорида радия [223Ra].
Расчет исследуемых дозировок
Согласно приведенным в публикации [25] данным, после введения пациентам 50 кБк/кг и 100 кБк/кг раствора 223Ra дихлорида, через 2 часа после введения в скелете аккумулировалось от 40 до 60% от введенной активности. Средняя масса скелета граждан Японии мужского пола в возрасте 65-79 лет составляет от 10 до 13 кг, что составляет ~17% от массы тела [15]. Расчет ориентировочного уровня накопления РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] показал, что в костной ткани будет аккумулировано 0,13-0,40 кБк/г. Если принять, что в области костной патологии накопление 223Ra дихлорида в среднем в 4,4 раза превышает накопление в интактной кости [15], диапазон уровней накопления в области костной патологии составит 0,57-1,76 кБк/г. C учетом длины пробега альфа частиц радия-223 не превышающего 10 диаметров клетки [26] и небольшой толщины костной структуры, аккумулирующей радий-223 [27] геометрически условия действия РФЛП хлорид радия [223Ra] на клетки метастатического очага in vivo и монослой опухолевых клеток в условиях in vitro сопоставимы. Соответственно диапазон дозировок РФЛП, рассчитанный для данного дизайна исследования (0,5-2,0 кБк/мл с шагом 0,5 кБк/мл), релевантен накоплению РФЛП в зоне костного метастазирования in vivo.
Описание in vitro тест-систем
В качестве in vitro тест-систем выбраны несинхронизированные монокультуры клеток злокачественных новообразований, наиболее часто метастазирующих в кости, так как в несинхронизированной культуре наблюдается примерно одинаковое распределение клеток по фазам клеточного цикла, выбранная модель достаточно адекватно отражает цитологический статус метастатического очага in vivo [28].
Культура аденокарциномы молочной железы человека линии MCF7
Время удвоения в стандартных условиях культивирования составляет 30-40 часов, типичный размер клеток 20-25 микрон [29]. Клетки этой линии туморогенны у иммунодефицитных мышей, образует смешанные (литические/бластические) метастазы в кости [30]. Образцы доступны в коллекциях: клеточных культур ЦКП «коллекция культур клеток позвоночных» Института цитологии РАН, Центра коллективного пользования «Биоресурсная коллекция опухолевых образцов, клеточных линий и моноклональных антител» НИИ ЭДиТО ФБГУ «НМИЦ онкологии имени Н.Н. Блохина» Минздрава РФ.
Культура аденокарциномы почки человека линии ACHN
Время удвоения в стандартных условиях культивирования составляет ~30 ч., типичный размер клеток 25-30 микрон [31]. Клеточная линия признана адекватной моделью метастатических заболеваний и является специфичной для исследований, ориентированных на изучение костных метастазов [32]. Клетки ACHN, трансплантированные в левый желудочек, дают костные метастазы [33]. Образцы доступны в коллекциях клеточных культур: Центра коллективного пользования «Биоресурсная коллекция опухолевых образцов, клеточных линий и моноклональных антител» НИИ ЭДиТО ФБГУ «НМИЦ онкологии имени Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, ООО «БиолоТ» (г. Санкт-Петербург).
Методы исследования и критерии оценки полученных результатов
В дизайне исследования использована схема эксперимента с однократным воздействием РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] на клеточные культуры. В качестве негативного контроля необходимо использовать клетки в полной среде без воздействия.
Время инкубирования тест-систем составляет не менее 4 суток, начиная с момента внесения суспензии клеток в культуральную среду, содержащую исследуемый РФЛП. При этом:
― на протяжении первых 3-4 ч. происходит седиментация и адаптация опухолевых клеток, а их облучение альфа-частицами происходит в 3D геометрии;
― в последующие 7-10 ч. клетки начинают пролиферировать, происходит увеличение доли клеток в S и G2/M фазах, количество клеток удваивается через равные промежутки времени. В это время начинает формироваться монослой клеток, прикрепленных ко дну культурального флакона. Облучение клеток происходит в 2D геометрии;
― в последующие 82 ч. активно формируется монослой клеток, прикрепленных ко дну культурального флакона. К концу этого временного периода в норме наступает стационарная фаза роста культуры клеток. Облучение клеток продолжается в 2D геометрии.
Методом определения цитотоксичности РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] является оценка целостности плазматической мембраны при окрашивании клеток витальным красителем трипановый синий. Выбор метода обоснован следующими соображениями:
- Использование классического для радиобиологии метода определения величины клоногенной способности [34] может быть невозможным в силу возможного сливного роста образовывающихся колоний. Кроме того, на результаты данного теста может повлиять не только факт воздействия на культуру клеток, но и присущая данной культуре эффективность клонирования.
- Сделать прогноз выживаемости клеточной популяции возможно по результатам теста на жизнеспособность (или цитотоксичность), который позволяет идентифицировать погибшие клетки вследствие нарушения целостности мембран, что приводит к необратимой гибели клеток.
Комплекс показателей, изучаемых при оценке цитотоксического действия РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] на культуру опухолевых клеток:
- Качественная оценка изменения общей морфологии, вакуолизации, расщепления, лизиса клеток, целостности клеточных мембран и полноты формирования клеточного монослоя.
- Количественная оценка выживаемости клеточной популяции и времени удвоения.
Методом определения антипролиферативного действия РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] является сравнение активности пролиферации клеток, подвергшихся действию РФЛП и клеток контроля. Показатели, изучаемые при оценке антипролиферативного действия РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] на культуру опухолевых клеток:
- Определение количества жизнеспособных клеток в культурах опухолевых клеток.
- Вычисление индекса ингибирования пролиферации.
Дизайн доклинического in vitro исследования отечественного радиофармацевтического лекарственного препарата на основе радия хлорида [223Ra] отражен в таблице 1.
Таблица 1. Дизайн доклинического in vitro исследования отечественного радиофармацевтического лекарственного препарата на основе радия хлорида [223Ra]
Table 1. Design of a preclinical in vitro study of a domestic radiopharmaceutical drug based on radium chloride [223Ra]
Тест-системы | 2D несинхронизированные культуры клеток:
― аденокарцинома почки человека линии ACHN; ― аденокарцинома молочной железы человека линии MCF7 |
||
Действующие дозировки РФЛП | 0,5-2,0 кБк РФЛП в 1 мл культуральной среды с шагом 0,5 кБк/мл | ||
Условия эксперимента | Культивирование тест-систем в течение 4 суток без смены культуральной среды, содержащей действующие дозировки РФЛП | ||
Контроль | Культивирование тест-систем в течение 4 суток без смены культуральной среды без РФЛП | ||
Методы исследования | Регистрируемые данные | Способ регистрации | Регистрирующее
оборудование |
Качественная оценка цитотоксического действия | Изменения общей морфологии, вакуолизации, расщепления, лизиса клеток, целостности клеточных мембран и полноты формирования клеточного монослоя | Визуальная оценка
структурных особенностей отдельных клеток и монослоя в целом; Фоторегистрация культуры c прижизненным окрашиванием трипановым синим |
― Микроскоп биологический инвертированный;
― Микроскоп биологический для исследования объектов в проходящем свете; ― Система визуализации и компьютерного анализа на основе цифровой камеры высокого разрешения, совместимая с микроскопами |
Количественная оценка цитотоксического действия | Подсчет выживших и погибших клеток после окрашивания трипановым синим | Микроскоп световой биологический для исследования объектов в проходящем свете | |
Оценка антипролиферативного действия | Общее количество клеток, количество окрашенных и не окрашенных клеток в аликвотах опытной и контрольной культур | Подсчет выживших и погибших клеток после окрашивания трипановым синим | Микроскоп световой биологический для исследования объектов в проходящем свете |
Математическая обработка данных | Анализ первичных данных, занесенных
в протоколы исследований |
Качественная оценка ― применяется система экспертных оценок [35].
Количественная оценка ― проводится вычисление процента погибших (окрашенных красителем) или выживших (неокрашенных) клеток после контакта с РФЛП на основе хлорида радия [223Ra] и индекса цитотоксичности (IC50) [36]. Оценка антипролиферативного действия ― вычисление индекса ингибирования пролиферации |
|
Статистический анализ данных | Анализ первичных данных, занесенных
в протоколы исследований |
Вычисление средней арифметической и ее средней ошибки.
Построение зависимостей доза-эффект. Оценка достоверности различий между группами с использованием t-критерия Стьюдента для независимых переменных |
Выводы
Результаты доклинических исследований РФЛП на основе хлорида радия [223Ra], выполненных по разработанному дизайну, будут основанием для принятия решения о возможности расширения показаний к медицинскому применению при злокачественных нозологиях, отличных от РПЖ.
Финансирование исследования
Работа выполнена в рамках государственного задания ФМБА России (регистрационный № НИОКТР 1023033100303-7).
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Литература
- Othman A., Winogradzki M., Lee L., et al. Bone Metastatic Breast Cancer: Advances in Cell Signaling and Autophagy Related Mechanisms // Cancers. ― 2021. ― 13 (17). ― P. 4310. doi: 10.3390/cancers13174310
- Press D.J., Miller M.E., Liederbach E., et al. De novo metastasis in breast cancer: occurrence and overall survival stratified by molecular subtype // Clin. Exp. Metastasis. ― 2017. ― 34 (8). ― P. 457-465. doi: 10.1007/s10585-017-9871-9
- Xofigo (radium Ra 223 dichloride). Package insert. Bayer Healthcare. U.S. Food and Drug Administration website. Revised December 2019. Accessed November 9, 2021. https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2019/203971s016lbl.pdf
- Pantel A.R., Eiber M., Beyder D.D., et al. SNMMI Procedure Standard/EANM Practice Guideline for Palliative Nuclear Medicine Therapies of Bone Metastases // J. Nucl. Med. Technol. ― 2023. ― 51 (3). ― P. 176-187. doi: 10.2967/jnmt.123.265936
- Кочетова Т.Ю., Крылов В.В., Петросян К.М. и др. Радия хлорид [223Ra] в лечении больных раком предстательной железы с метастазами в кости. Рекомендации по клиническому применению // Онкоурология. ― 2020. ― 16 (1). ― P. 114-23. doi: 10.17650/1726-9776-2020-16-1-114-123
- Hoskin P., Sartor O., O’Sullivan J.M., et al. Efficacy and safety of radium-223 dichloride in patients with castration-resistant prostate cancer and symptomatic bone metastases, with or without previous docetaxel use: a prespecified subgroup analysis from the randomised, double-blind, phase 3 ALSYMPCA trial // Lancet Oncol. ― 2014. ― 15 (12). ― P. 1397-406. doi: 10.1016/S1470-2045(14)70474-7
- Каприн А.Д., Костин А.А., Воробьев Н.В., Попов С.В. Терапия препаратом радий-223 больных с костными метастазами кастрационно-резистентного рака предстательной железы // Медицинский Совет. ― 2018. ― №10. ― C. 78-82. doi: 10.21518/2079-701X-2018-10-78-82
- Русаков И.Г., Грицкевич А.А., Байтман Т.П., Мишугин С.В. Эффективность и безопасность применениярадия-223 в лечении метастатического кастрационно-резистентного рака предстательной железы // Медицинский Совет. ― 2020. ― 20. ― С. 70-82. doi: 10.21518/2079-701X-2020-20-70-82
- Юрмазов З.А., Усынин Е.А., Медведева А.А. и др. Клинический опыт применения радия-223 у больных с костными метастазами при кастрационно-резистентном раке предстательной железы // Онкоурология. ― 2022. ― 18 (1). ― С. 70-6. doi: 10.17650/1726-9776-2022-18-1-70-76
- Ritter M.A., Cleaver J.E., Tobias C.A. High-LET radiations induce a large proportion of non-rejoining DNA breaks // Nature. ― 1977. ― 266 (5603). ― P. 653-5. doi: 10.1038/266653a0
- Suominen M.I., Fagerlund K.M., Rissanen J.P., et al. Radium-223 Inhibits Osseous Prostate Cancer Growth by Dual Targeting of Cancer Cells and Bone Microenvironment in Mouse Models // Clin. Cancer Res. ― 2017. ― 23 (15). ― P. 4335-4346. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-16-2955
- Neuman W.F., Hursh J.B., Boyd J., Hodge H.C. On the mechanism of skeletal fixation of radium // Ann. N. Y. Acad. Sci. ― 1955. ― 62. ― P. 125-136. doi: 10.1111/j.1749-6632.1955.tb35369.x
- Morris M.J., Corey E., Guise T.A., et al. Radium-223 mechanism of action: implications for use in treatment combinations // Nat. Rev. Urol. ― 2019. ― 16 (12). ― P. 745-756. doi: 10.1038/s41585-019-0251-x
- Yoshida K., Kaneta T., Takano S., et al. Pharmacokinetics of single dose radium-223 dichloride (BAY 88-8223) in Japanese patients with castration-resistant prostate cancer and bone metastases // Ann. Nucl. Med. ― 2016. ― 30 (7). ― P. 453-60. doi: 10.1007/s12149-016-1093-8
- Yonei Y., Miwa Y., Hibino S., et al. Japanese Anthropometric Reference Data ― Special Emphasis on Bioelectrical Impedance Analysis of Muscle Mass // Anti-Aging Medicine. ― 2008. ― 5 (6). ― P. 63-72. doi: 10.3793/JAAM.5.63
- Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей ред. чл.-корр. РАМН проф. Р.У. Хабриева. ― 2 изд., перераб. и доп. ― М.: ОАО «Медицина», 2005. ― С. 637-51.
- Пескова Н.Н., Балалаева И.В., Брилкина А.А., и др. Оценка жизнеспособности клеток in vitro. Учебно-методическое пособие. ― Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2020. ― 25 с.
- Фрешни Р.Я. Культура животных клеток: Практическое руководство. ― М.: Бином. Лаборатория знаний, 2018. ― 691 с.
- Galluzzi L., Vitale I. Molecular mechanisms of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018 // Cell Death & Differentiation. ― 2018. ― Vol. 25. ― P. 486-541.
- Дуфлот В.Р., Ермаков В.С., Клементьева О.Е. и др. Изучение радиофармпрепарата для лучевой терапии метастатических опухолей позвоночника (радионуклидной вертебропластики) путем доклинической оценки терапевтического потенциала // Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи. ― 2019. ― Т. 11, №1. ― С. 42-50.
- Klementyeva O., Korsunsky V., Malysheva A. Tumor cells damage induced by the influence of 188Re-tricarbonyl citrate and 188Re-tricarbonyl octreotide // Eur. J. of Nucl. Med. and Molecular Imaging. ― 2010. ― Vol. 37, supp. 2. ― P. S353.
- Takalkar A., Paryani B., Adams S., Subbiah V. Radium-223 dichloride therapy in breast cancer with osseous metastases // BMJ Case Rep. ― 2015. ― 2015. ― bcr2015211152. doi: 10.1136/bcr-2015-211152
- Costa R.P., Tripoli V., Princiotta A., et al. Therapeutic effect of RA223 in the management of breast cancer bone metastases // Clin. Ter. ― 2019. ― 170 (1). ― P. e1-e3. doi: 10.7417/CT.2019.2100
- Abou D.S., Ulmert D., Doucet M., et al. Whole-Body and Microenvironmental Localization of Radium-223 in Naïve and Mouse Models of Prostate Cancer Metastasis // J. Natl. Cancer Inst. ― 2015. ― 108 (5). ― djv380. doi: 10.1093/jnci/djv380
- Yoshida K., Kaneta T., Takano S. et al. Pharmacokinetics of single dose radium-223 dichloride (BAY 88-8223) in Japanese patients with castration-resistant prostate cancer and bone metastases // Ann. Nucl. Med. ―2016. ― 30. ― P. 453-460. doi: 10.1007/s12149-016-1093-8
- Ceder J., Elgqvist J. Targeting Prostate Cancer Stem Cells with Alpha-Particle Therapy // Frontiers in oncology. ― 2017. ― 6. ― 273. doi: 10.3389/fonc.2016.00273
- Nilsson S. Radium-223 Therapy of Bone Metastases in Prostate Cancer // Seminars in nuclear medicine. ― 2016. ― 46 (6). ― P. 544-556. doi: 10.1053/j.semnuclmed.2016.07.007
- Merrill G.F. Cell synchronization // Methods in Cell Biology. ― 1998. ― №57. ― P. 229-249.
- Moon H.S., Kwon K., Hyun K.A., et al. Continual collection and re-separation of circulating tumor cells from blood using multi-stage multi-orifice flow fractionation // Biomicrofluidics. ― 2013. ― 7 (1). ― 14105. doi: 10.1063/1.4788914
- Yi B., Williams P.J., Niewolna M., et al. Tumor-derived platelet-derived growth factor-BB plays a critical role in osteosclerotic bone metastasis in an animal model of human breast cancer // Cancer Res. ― 2002. ― 62 (3). ― P. 917-23.
- Rebelo L.M., de Sousa J.S., Mendes Filho J., Radmacher M. Comparison of the viscoelastic properties of cells from different kidney cancer phenotypes measured with atomic force microscopy // Nanotechnology. ― 2013. ― 24 (5). ― 055102. doi: 10.1088/0957-4484/24/5/055102
- Brodaczewska K.K., Szczylik C., Fiedorowicz M. et al. Choosing the right cell line for renal cell cancer research // Mol Cancer. ― 2016. ― 15. ― 83. doi: 10.1186/s12943-016-0565-8
- Weber K.L., Pathak S., Multani A.S., et al. Characterization of a renal cell carcinoma cell line derived from a human bone metastasis and establishment of an experimental nude mouse model // The Journal of urology. ― 2002. ― 168 (2). ― P. 774-779.
- Puck T.T., Marcus P.I. Action of x-rays on mammalian cells // J. Exp. Med. ― 1956. ― 103 (5). ― P. 653-66. doi: 10.1084/jem.103.5.653
- Герасимов И.Г., Попандопуло А.Г. Оценка жизнеспособности клеток по их морфометрическим параметрам на примере культивируемых фибробластов // Цитология. ― 2007. ― Т. 49, №3. ― C. 204-209.
- Ritz C., Baty F., Streibig J.C., Gerhard D. Dose-Response Analysis Using R // PLoS One. ― 2015. ― 10 (12). ― e0146021. doi: 10.1371/journal.pone.0146021