Онкология СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ДОКЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ РАКА НА ОСНОВЕ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ
rus
ПОВОЛЖСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ВЕСТНИК

Научно-практический журнал для практикующих врачей и научных работников

Поиск

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ДОКЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ РАКА НА ОСНОВЕ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ

© Ш.Х. Ганцев, А.Б. Полетаев, А.А. Полетаева, А.С. Юсупов, 2011
УДК 616-006.6-078

Ш.Х. Ганцев1, А.Б. Полетаев2, А.А. Полетаева3, А.С. Юсупов1

 

 

1 ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет», Уфа

2 НИИ нормальной физиологии им. П.К.Анохина РАМН, Москва

3 МИЦ «Иммункулус», Москва

 

 

Ранняя диагностика злокачественных новообразований является актуальной задачей онкологии. Особенно это касается потребности в разработках методов выявления злокачественных опухолей на ранних стадиях развития.

Используемые на сегодняшний день тесты на «онкомаркеры» за многие годы применения показали свою весьма низкую специфичность и чувствительность (Xie et al., 2011), а потребность в новых, более надежных и информативных биохимических (иммунохимических) способах диагностики онкологических заболеваний весьма велика. В 2009 г. нами создана международная научно-исследовательская группа, задачей которой является разработка и клиническая апробация принципиально нового подхода в лабораторной диагностике злокачественных новообразований.

Известно, что в ходе прогрессирующей опухолевой трансформации происходит постепенное увеличение доли менее зрелых клеток, несущих меньше черт и признаков ткани-прародительницы (феномен конвергенции опухолевых признаков); при этом опухолевые клетки, происходящие из разных органов и тканей, приобретают определенное сходство между собой в антигенном составе, определяемое, в частности, феноменом «эмбрионализации». Это позволило предположить принципиальную возможность создания универсальных диагностических онкотестов, пригодных для раннего выявления лиц группы риска по развитию злокачественных опухолей разных типов и локализации.

Процесс формирования и роста самых разных злокачественных опухолей сопровождается повышением продукции аутоантител (ауто-АТ) к опухолеас-социированным антигенам (Belousov et al., 2008). Этот феномен является прямым свидетельством в пользу того, что иммунная система в обязательном порядке, на ранней стадии обращает внимание на растущую опухоль, «видит» ее (Xie et al., 2011).

Экспериментально полученные данные свидетельствуют, что изменения в антигенном составе растущей опухоли являются количественными. Эти изменения неизбежно сопровождаются вторичными, а также количественными сдвигами в продукции естественных ауто-АТ соответствующей антигенной направленности. Поэтому относительное содержание многих ауто-АТ при злокачественном росте может существенно отличаться от ситуации нормы. В результате происходит изменение общего паттерна (относительных соотношений) ауто-АТ сыворотки крови. Именно на этом феномене основывается способность иммунной системы «видеть» растущую опухоль. Мы предположили, что феномен опухолеассоциированных количественных «сдвигов» в составах сывороточных ауто-АТ можно использовать в диагностических целях.

В данной работе мы провели анализ особенности количественных изменений в относительном содержании некоторых естественных ауто-АТ, характерных для здоровых пациентов, пациентов, имеющих фоновые или предраковые заболевания, и пациентов с верифицированным злокачественным опухолевым процессом. Например, совместно с кафедрой акушерства и гинекологии РМАПО проведено исследование сывороточных паттернов ауто-АТ, типичных для сывороток крови клинически здоровых лиц (n=60, мужчин — 18, женщин — 34; средний возраст 24 года), женщин с дисплазиями шейки матки I (п=20; средний возраст 32 года), II (n=14; средний возраст 34 года) и III степени (n=22; средний возраст 37 лет) и женщин с морфологически подтвержденным раком шейки матки 1—2-й клинических групп (n=27; средний возраст 52 года).

С помощью стандартизованных ИФА тест-систем в образцах сывороток крови определяли содержание ауто-АТ, направленных к синтетическим фрагментам белков, экспрессия которых заметно меняется в условиях малигнизации, а именно: к фрагментам белков NOTCH3, R-JAG, JAG-I, sc-Jagged, являющихся мембранными белками, участвующими в регуляции клеточной пролиферации и дифференцировки; белка Nuclear Receptor Coactivator 4 (регулятор транскрипции); белка E3 SUMO-protein ligase (участвует в посттрансляционной модификации белков); белка LAGE-1 (экспрессируется в повышенных количествах на клетках опухолей разных типов); белка MAGE-A3 (участвует в механизмах опухолевой прогрессии); белка NY-ESO/LAGE (экспрессируется в повышенных количествах на клетках опухолей разных типов); белка SSX-4 (экспрессия повышается в клетках сарком); белка TRAG-3 (принадлежит к раково-тестикулярным антигенам); белка HER-2, белка р53, белка cyclin B1 (субъединица ДНК-зависимой РНК-полимеразы); белка S100 (участвует в регуляции апоптоза); белка collagen II, белка кератина, инсулина и в2-гликопротеина I. Синтез пептидных фрагментов отобранных белков был выполнен по нашему заказу компанией «Peptide 2.0 Inc» (Chantilly, США). Иммуноферментный анализ сывороточной иммунореактивности с отобранными антигенами проводили по общепринятым схемам на 96-луночных планшетах Maxisorb (Полетаев А.Б. и др., 2003).

Среднюю индивидуальную иммунореактивность сывороток и нормализованное содержание ауто-АТ к каждому из антигенов (сывороточные паттерны ауто-АТ) рассчитывали, используя компьютерную программу, разработанную МИЦ «Иммункулус». В работе оценивали индивидуальные особенности «профилей» (паттерн интегральной аутореактивности пациента), т.е. отклонения относительного сывороточного содержания тех или иных из исследовавшихся ауто-АТ от индивидуальной средней иммунореактивности. Полученные результаты анализировали методами непараметрической статистики (критерий Манна—Уитни) с использованием пакета программ Statistica 6.

С помощью мультикомпонентных иммунофер-ментных тест-систем были проанализированы особенности профилей иммунореактивности 16 разных ауто-АТ сывороток крови клинически здоровых лиц и пациентов с различными формами злокачественного процесса. Установлено, что определенные соотношения между иммунореактивностью ауто-АТ разной антигенной специфичности формируют определенный для здоровых лиц профиль имму-нореактивности. Характерно, что сывороточные уровни одних ауто-АТ у здоровых лиц (ауто-АТ к антигенам R- JAG, JAG-I, sc-Jagge, кератин; р<0,05 — 0,01) были достоверно выше, чем у больных, тогда как уровни других (ауто-АТ к NOTC3, HER-2, инсулину и в2-гликопротеину I; р<0,05 — 0,01) были достоверно выше у больных со злокачественным процессом. Полученные данные подтверждают факт количественных изменений в экспрессии определенных антигенов, сопровождающих процессы малигни-зации. Это находит свое отражение в изменениях профилей естественных ауто-АТ, направленных к соответствующим антигенам.

Выявленные нашей исследовательской группой иммунологические феномены могут послужить основой для разработки принципиально новых иммунодиагностических подходов, пригодных для обнаружения злокачественных опухолей на ранних стадиях их развития.



Наши партнеры



Copyright © 2015 | Все права защищены
WELCOME | ПОДДЕРЖКА