КОМПЛЕКСНЫЙ ПОДХОД В ЦИТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЭКССУДАТОВ ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОЧИП ТЕСТ-СИСТЕМЫ SER-1

от
Print Friendly, PDF & EmailРаспечатать / Сохранить в PDF

© И.А. Круглова, С.В. Зиновьев, О.В. Уткин, А.Н. Денисенко, П.С. Зубеев, Е.П. Абалихина, Е.Ю. Чернавина, Н.А. Илларионова, С.В. Гамаюнов, 2023

УДК 616-091.8+618.11-006.04-07

И.А. Круглова1,4, С.В. Зиновьев2, О.В. Уткин3, А.Н. Денисенко1, П.С. Зубеев4, Е.П. Абалихина4, Е.Ю. Чернавина4, Н.А. Илларионова2, С.В. Гамаюнов2

1ГБУЗ НО «Городская больница №35 Советского района г. Нижнего Новгорода», г. Нижний Новгород

2ГБУЗ НО «Нижегородский областной клинический онкологический диспансер», г. Нижний Новгород

3ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора», г. Нижний Новгород

4ГБУЗ НО «Городская больница №33», г. Нижний Новгород

Круглова Ирина Александровна ― врач клинической лабораторной диагностики (цитолог) клинико-диагностической лаборатории ГБУЗ НО «Городская больница №35 Советского района г. Нижнего Новгорода»

603089, г. Нижний Новгород, ул. Республиканская, д. 47, тел.: (831) 428-81-21, +7-908-239-52-71, e-mail: irisha-kruglova@yandex.ru, ORCID ID: 0000-0001-7955-349X

Реферат. Рак яичников ― гетерогенная группа злокачественных новообразований, где  из-за отсутствия специфических клинических симптомов на ранней стадии заболевания более 75% пациентов диагностируются на поздней стадии. Одним из основных, а за частую и единственных первых признаков заболевания является накопление асцитической жидкости. В этой связи возникает первостепенная необходимость забора асцитической жидкости с целью цитологического исследования для подтверждения серозита и направления пациента к онкологу, а также оптимизации протокола обследования на догоспитальном этапе. Такой же приоритет возникает и в отношении забора плевральной жидкости, так как зачастую вследствие общей интоксикации плеврит может носить реактивный характер, верификация которого играет ключевую роль для выбора тактики лечения пациента. «Золотым стандартом» определения характера выпотных жидкостей является цитологическое исследование. При этом его диагностическая эффективность составляет 48-88% для исследования асцитической жидкости и 62-90% для плевральной жидкости. Для повышения показателей эффективности метода необходимо применение комплексного подхода с использованием ИЦХ исследований. В 2022 году в РФ была зарегистрирована первая тест-система для иммуцитохимического исследования в формате биочипа. С ее помощью можно выполнять ИЦХ-исследования без дополнительного оснащения лаборатории за счет принципа «Лаборатория-на-чипе», что создает необходимые условия для верификации диагностического процесса уже на этапе центров амбулаторной поликлинической помощи, сокращая время для начала лечения у конкретной категории больных.

Цель работы ― оценить диагностическую информативность использования тест-системы SER-1 (ООО «РУССЭЛЛ», Россия) в формате биочипа для выявления диссеминации рака яичников.

Материал и методы. Проанализирован 131 образец биологического материала (78 образцов асцитической жидкости, 34 смыва с брюшной полости и 19 образцов плевральной жидкости), полученных от пациенток с подозрением на РЯ. Все образцы жидкости первоначально были изучены цитологически с оценкой характера экссудата, клеточности. Далее результаты исследований классифицировали согласно международной цитологической классификации выпотных жидкостей (TIS RSFC). В дальнейшем кейсы, которые врач-цитолог отнес к группам «атипия неясного значения», «подозрение на злокачественный процесс» были направлены на ИЦХ-исследование. С использованием тест-системы SER-1 (ООО «РУССЭЛЛ», Россия). Диагностическая эффективность метода оценивалась как в общем, так и отдельно для асцитической, плевральной жидкостей и интраоперационных смывов с использованием метода построения ROC-кривой.

Результаты. Рассчитанные при ROC-анализе показатели эффективности первичного цитологического исследования обобщенного материала (рис. 4а) составили: точность ― 66,4%, чувствительность ― 63,2%, специфичность ― 73,5%. При анализе показателей эффективности первичного цитологического исследования по результатам ROC-анализа материала согласно локализации получены следующие данные: для асцитической жидкостей точность, чувствительность и специфичность определены на уровне 67,6%, 62%, 81% соответственно; для плеврального выпота на уровне 66,7%, 62,5%, 71,4% соответственно; и для интраоперационных смывов на уровне 62,5%, 66,7%, 50% соответственно. Рассчитанные показатели эффективности комплексного цитологического и ИЦХ-исследования по данным ROC-анализа составили: для общей выборки: точность, чувствительность, специфичность ― 67,3%, 57,9%, 88,2% соответственно; для асцитической жидкости: 67,6%, 58%, 90,5%; для плеврального выпота: 66,7%, 50%, 85,7%; для интраоперационного смыва: 66,7%, 61,1%, 83,3%.

Заключение. Применение комплексного подхода в виде цитологического и ИЦХ-исследования выпотных жидкостей при РЯ позволяет повысить выявляемость клеток злокачественных опухолей в цитологических образцах в 2,0 раза и снижает долю заключений с атипией неясного значения на 10% и более. Применение тест-системы SER-1 способствует более точному обнаружению опухолевых клеток в экссудатах из серозных полостей при раке яичников, повышая показатели эффективности цитологического исследования.

Ключевые слова: рак яичников, асцит, цитологическое исследование, ИЦХ, SER-1.

Введение

Рак яичников (РЯ) включает гетерогенную группу злокачественных новообразований, среди которых в пятерку самых распространенных входят высоко- и низкодифференцированные серозные, эндометриоидные, светлоклеточные и муцинозные подтипы [1]. Эпителиальный рак яичников характеризуется большим молекулярным и гистологическим разнообразием. Наиболее частым и летальным подтипом является высоко злокачественный серозный РЯ. Из-за отсутствия специфических клинических симптомов на ранней стадии заболевания более 75% пациентов с РЯ диагностируются на поздней стадии [2]. Одним из основных, а за частую и единственных первых признаков заболевания является накопление асцитической жидкости. Эпителиальные злокачественные опухоли яичников, а также эндометрия, молочной железы, толстой кишки, желудка и поджелудочной железы обусловливают более 80% случаев злокачественных асцитов. При этом наиболее распространенной первичной локализацией рака, сопровождающейся асцитом, является РЯ, составляя до 38% случаев асцитов, ассоциированных со злокачественными опухолями у женщин. Растущая опухоль в свою очередь инициирует в брюшной полости провоспалительный ответ, тем самым способствуя прикреплению опухолевых клеток на поверхности брюшины, так называемых перитонеальных имплантатов, служащих основной причиной появления асцита или плеврита у пациентов с РЯ. Механизм образования асцита при перитонеальном канцероматозе в случае РЯ сложен и в значительной степени обусловлен сочетанием повышенного поступления жидкости в брюшную полость и снижением ее оттока. Степень выраженности канцероматоза при РЯ напрямую взаимосвязана с запущенностью заболевания и продукцией асцитической жидкости. Подтверждена взаимосвязь между стадией РЯ и объемом асцитической жидкости [21].

По данным N. Lazarov et аl., частота выявления злокачественного асцита при РЯ 1а стадии составляет 29%, при РЯ 1с стадии достигает 59%. Возраст, стадия, степень дифференцировки опухоли и цитологическая картина асцитической жидкости являются важными прогностическими маркерами раннего РЯ и высокого риска рецидивирования. В 2013 году в когортном исследовании (n=215) получены важные результаты по выживаемости больных ранним РЯ, свидетельствующие, что наличие асцитической жидкости и ее количество играют меньшее прогностическое значение, чем выявление опухолевых клеток в ней. Так, по данным этого исследования 5-летняя выживаемость больных в группе с позитивной цитологией асцитической жидкости была значительно хуже, чем с негативной, 21 и 66,7 % соответственно (р=0,0059) [22, 23].

Подобные исследования подтверждают ценность цитологического исследования жидкости и взятие смывов с брюшины в рамках выполнения хирургического стадирования. Прогноз пациенток с РЯ ранней стадии при несоблюдении указанных принципов и игнорировании данных цитологического исследования становится намного более неблагоприятным, поскольку может повлечь неправильную тактику лечения [2, 4, 21].

В этой связи возникает первостепенная необходимость забора асцитической жидкости с целью цитологического исследования для подтверждения серозита и направления пациента к онкологу, а также оптимизации протокола обследования на догоспитальном этапе. Такой же приоритет возникает и в отношении забора плевральной жидкости, так как зачастую вследствие общей интоксикации плеврит может носить реактивный характер, верификация которого играет ключевую роль для выбора тактики лечения пациента. «Золотым стандартом» определения характера выпотных жидкостей является цитологическое исследование. При этом его диагностическая эффективность составляет 48-88% для исследования асцитической жидкости и 62-90% для плевральной жидкости. Данный факт обусловлен сложностью в постановке диагноза врачом-цитологом, использующим подходы классической микроскопии, особенно в лабораториях, которые не специализируются на цитоморфологической характеристике серозных жидкостей [5-12]. На современном этапе цитологическое исследование выпотных жидкостей должно основываться на принципах Международной классификации цитопатологии выпотных жидкостей (TIS RSFC 2020). Основной задачей применения в практике данной цитологической классификации является систематизация категоризации для представления цитологических образцов объединенных по единообразным критериям и диагностической терминологии, а также улучшение диагностической воспроизводимости с помощью стандартизированных оценок риска злокачественных новообразований. При этом разработанная классификация охватывает все этапы исследования от преаналитического до формирования окончательного цитологического заключения и рекомендованных дополнительных методах исследования и уточнения гистологической принадлежности клеточных элементов выпотных жидкостей. Применение дополнительных уточняющих методик рекомендовано для таких категорий цитологических заключений как атипия клеток неясного значения (AUS), клетки подозрительные на злокачественные (SFM), а также злокачественные клетки (MAL). Указанные выше категории требуют двухступенчатого подхода к исследованию, где на первом этапе идет первичное цитоморфологического исследование с формированием первичного заключения. На втором этапе используются методы исследования уточняющего характера (иммуноцитохимия (ИЦХ), молекулярно-генетические методы). Однако в современных реалиях доступность дополнительных методов исследования мала и возможна только в крупных региональных или федеральных центрах, что существенно сокращает возможности метода и доступность исследования.

Вариантом решения проблемы является внедрение методик ИЦХ, в особенности анализа экспрессии белка ЕрCAM [7-13]. Данный белок представляет собой молекулу адгезии эпителиальных клеток и состоит из двух гликопротеинов молекулярной массой 34 и 39 кД, которые находятся преимущественно на поверхности клеточной мембраны почти всех эпителиальных клеток, за исключением большинства видов плоского эпителия, гепатоцитов, проксимальных отделов эпителия почечных канальцев, желудочных париетальных и миоэпителиальных клеток. Неизмененные мезотелиальные клетки ЕрCAM-отрицательны, но могут давать очаговую реакцию при реактивных изменениях [12, 14, 15]. ЕрCAM экспрессируется в подавляющем большинстве аденокарцином (в 50-100% наблюдений) [15-18], а также в нейроэндокринных опухолях, включая мелкоклеточную карциному [16, 14]. Эпителиоидная и бифазная мезотелиома являются ЕрCAM-позитивными в 4-26% наблюдений [14, 19]. При оценке результатов ИЦХ значение имеет мембранная локализация маркера. Обнаружение положительно реагирующих клеток при правильно проведенной ИЦХ-реакции и соответствующих контрольных исследованиях, а также при изучении морфологии клеточных элементов свидетельствует о наличии аденогенного рака [20]. Отметим, что применение такого подхода требует соответствующего оснащения лаборатории, методик контроля и потоков исследований [17]. В 2022 году в РФ была зарегистрирована первая тест-система для иммуцитохимического исследования в формате биочипа (РУ РЗН №2022/17624). С ее помощью можно выполнять ИЦХ-исследования без дополнительного оснащения лаборатории за счет принципа «Лаборатория-на-чипе», что создает необходимые условия для верификации диагностического процесса уже на этапе центров амбулаторной поликлинической помощи, сокращая время для начала лечения у конкретной категории больных.

 Цель работы ― оценить диагностическую информативность использования тест-системы SER-1 (ООО «РУССЭЛЛ», Россия) в формате биочипа для выявления диссеминации рака яичников.

Материал и методы

Проанализирован 131 образец биологического материала (78 образцов асцитической жидкости, 34 смыва с брюшной полости и 19 образцов плевральной жидкости), полученных от пациенток с подозрением на РЯ, обратившихся за плановой или экстренной медицинской помощью в хирургический стационар ГБУЗ НО «Городская больница №35», ГБУЗ НО «Городская больница №33», ГБУЗ НО «Городская клиническая больница №40» г. Н. Новгорода. Образцы экссудата были получены от пациентов путем пункции заднего свода или передней брюшной стенки для асцитической жидкости и трансторакальной пункции для плеврита. Объем полученного материала варьировал от 10 до 2000 мл. Забор клеточного материала при интраоперационных смывах производили с помощью стерильного раствора глюкозы (4%). Жидкости доставлялись в лабораторию не позднее 2 часов с момента забора. Весь материал подвергался центрифугированию на цитоцентрифуге Hospitecs Diagnostics (Италия). Все образцы жидкости первоначально были изучены цитологически с оценкой характера экссудата, клеточности. Далее результаты исследований классифицировали согласно международной цитологической классификации выпотных жидкостей (TIS RSFC) (рис. 1).

Рис. 1. Международная цитологическая классификация выпотных жидкостей (TIS RSFC) Farahani SJ, Baloch Z. Are we ready to develop a tiered scheme for the effusion cytology? A comprehensive review and analysis of the literature. Diag Cytopathol. 2019;47(11):1145–59

Fig. 1. International cytological classification of effusion fluids (TIS RSFC)  Farahani SJ, Baloch Z. Are we ready to develop a tiered scheme for the effusion cytology? A comprehensive review and analysis of the literature. Diag Cytopathol. 2019;47(11):1145–59

В дальнейшем кейсы, которые врач-цитолог отнес к группам «атипия неясного значения», «подозрение на злокачественный процесс» были направлены на ИЦХ-исследование. С использованием тест-системы SER-1 (ООО «РУССЭЛЛ», Россия) проводилось ИЦХ-исследование, результаты которого визуализировались с использованием микроскопа Zeiss Primo Star (Carl Zeiss, Германия). Протокол постановки реакции (рис. 2) включал в себя фазу подготовки цитологического образца ― центрифугирование экссудата при центробежном ускорении не более 800 g в течение 5 минут с последующим нанесением полученного материала на рабочую поверхность тест-системы и высушиванием на воздухе. Перед проведением протокола окрашивания материал фиксировался в 95% этаноле в течение 60 секунд. Для блокирования активности эндогенной пероксидазы применялась инкубация с раствором 3% перекиси водорода в течение 10 минут. Первичные антитела инкубировались в течение 30 минут при 37̊С. Этап визуализации результатов включал применение растворов энхайзера и вторичных антител с инкубацией по 15 минут каждый. Для окрашивания продуктов реакции использовались растворы диаминобензидина и гематоксилина Майера с инкубацией на 8 и 2 минуты соответственно. При этом в процессе проведения реакции перед сменой реагентов осуществлялась промывка тест-системы в буферном растворе. Результаты исследования классифицированы согласно международной цитологической классификации выпотных жидкостей (TIS RSFC). Все пациенты с канцероматозом брюшной полости и доброкачественными новообразованиями яичников имели гистологическую верификацию процесса. В 86 случаях у пациентов верифицированы доброкачественные опухоли яичников, в 45 случаях диссеминированный рак яичников.

Рис. 2. Протокол постановки ИЦХ реакции на тест-системе SER-1

Fig. 2. Protocol for setting up the ICC reaction on the SER-1 test system

Диагностическая эффективность метода оценивалась как в общем, так и отдельно для асцитической, плевральной жидкостей и интраоперационных смывов с использованием метода построения ROC-кривой (Online ROC Curve Calculator. John Eng, M.D. (jeng@jhmi.edu) Russell H. Morgan Department of Radiology and Radiological Science Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, Maryland, USA) http://www.rad.jhmi.edu/jeng/javarad/roc/JROCFITi.html.

 Результаты и обсуждения

По результатам первичного цитологического исследования 131 образца в 16,0% (21 случай) дано заключение о недиагностическом характере материала. В результате исследуемые группы формировались с использованием 110 образцов клинического материала. По данным гистологического исследования злокачественное поражение яичников подтверждено в 65,6%, а 34,4% составили доброкачественные изменения. Интраоперационные смывы были получены в ходе оперативного лечения 35,0% пациентов, при этом доля пациентов со злокачественным поражением яичников составила 82,0%.

При цитологическом исследовании асцитической жидкости были получены следующие данные: не диагностический материал (ND) ― 8,9%, отсутствие злокачественных клеток (NFM) ― 43,7%, наличие клеток с атипией неясного значения (AUS) ― 10,3%, подозрение на наличие злокачественного процесса (SFM) ― 17,9%, злокачественная природа клеток (MAL) ― 19,2%. Дополнительное ИЦХ-исследование экспрессии белка ЕрСАМ с помощью тест-системы SER 1 привело к изменениям результатов диагностики в рамках следующих категорий: NFM ― 51,3%, AUS ― 0%, SFM ― 6,4%, MAL ― 33,4%.

Цитологическое исследование плевральной жидкости показало следующие результаты: не диагностический материал (ND) ― 21,1%, отсутствие злокачественных клеток (NFM) ― 42,1%, наличие клеток с атипией неясного значения (AUS) ― 15,8%, подозрение на наличие злокачественного процесса (SFM) ― 10,5%, злокачественная природа клеток (MAL) ― 10,5%. Дополнительное ИЦХ-исследование экспрессии белка ЕрСАМ с помощью тест-системы SER 1 привело к изменениям результатов диагностики в рамках следующих категорий: NFM ― 52,6%, AUS ― 0%, SFM ― 5,2%, MAL ― 21,1%.

В случае цитологического исследования интраоперационных смывов были получены следующие результаты: не диагностический материал (ND) ― 29,4%, отсутствие злокачественных клеток (NFM) ― 26,5%, наличие клеток с атипией неясного значения (AUS) ― 11,8%, подозрение на наличие злокачественного процесса (SFM) ― 17,6%, злокачественная природа клеток (MAL) ― 14,7%. Дополнительное ИЦХ-исследование экспрессии белка ЕрСАМ с помощью тест-системы SER 1 привело к изменениям результатов диагностики в рамках следующих категорий: NFM ― 38,3%, AUS ― 0%, SFM ― 2,9%, MAL ― 29,4%.

На современном этапе используется пятиуровневая терминологическая система классификации выпотных жидкостей (TIS RSFC) (рис. 3), в соответствии с которыми выделяют:

  • Недиагностический материал (ND);
  • Отрицательный результат на злокачественность (NFM);
  • Атипия неопределенной значимости (AUS);
  • Подозрение на злокачественность (SFM);
  • Злокачественные (MAL) ― первичные и вторичные.

Рис. 3. Цитологическая картина экссудата при различных категориях по международной классификации. А) недиагностический материал; Б) материал отрицательный на наличие клеток ЗНО; В) клетки с атипией неясного значения; Г) материал подозрительный на наличие злокачественных клеток; Д) материал с клетками ЗНО. Окраска по Романовскому, увеличение х1000

Fig. 3. Cytological picture of exudate in various categories according to the international classification. A) non-diagnostic material; B) material negative for the presence of tumor cells; C) cells with atypia of unclear significance; D) material suspicious for the presence of malignant cells; E) material with tumor cells. Romanovsky coloring, magnification x1000

На основании рекомендаций данной классификации к группе недиагностического материала следует относить бесклеточные или почти бесклеточные образцы, образцы с выраженной дегенерацией клеток и значительной примесью крови, а также другими артефактами. Следует отметить, что наименьшим допустимым объемом для исследования принято считать 50-70 мл выпотных жидкостей. При цитологическом заключении о недиагностическом материале рекомендовано повторное исследование при новом накоплении жидкости. В нашей работе данный материал составил 16,0% от общего количества исследований. Повторный забор экссудата на исследование не проводился в связи с особенностями оказания медицинской помощи (перевод в другой стационар, отказ пациента от процедуры). Образцы материала, отнесенного при цитологическом исследовании в категорию недиагностического, не учитывались в общей выборке при расчете показателей эффективности метода.

Наибольший интерес в цитологической диагностике представляет собой материал, отнесенный к третьей, четвертой и пятой категориям по классификации. Согласно рекомендациям классификации весь описанный выше материал подлежит двухэтапному исследованию: на первом этапе цитологическому анализу, а на втором этапе использованию дополнительных уточняющих методик (ИЦХ, FISH-исследования и др.) с формированием в итоге окончательного заключения.

В результате нашего исследования на этапе первичного морфологического (цитологического) анализа материал, отнесенный к III-V категориям, составил 47,4% при диагностике асцитической жидкости, 36,8% при диагностике плеврального выпота и 43,8% в случае интраоперационного смыва. Основными причинами затруднений в ходе цитологической верификации явились выраженные реактивные изменения мезотелиальных клеток, обильные лейкоцитарные и гистиоцитарные инфильтрации относительно снижающие количество исследуемых клеток в препарате, а также выраженные дегенеративные изменения мезотелиальных клеток, связанные с нарушениями правил преаналитического этапа исследования.

Рассчитанные при ROC-анализе показатели эффективности первичного цитологического исследования обобщенного материала (рис. 4а) составили: точность ― 66,4%, чувствительность ― 63,2%, специфичность ― 73,5%.

При анализе показателей эффективности первичного цитологического исследования по результатам ROC-анализа материала согласно локализации (рис. 4б-г) получены следующие данные: для асцитической жидкостей точность, чувствительность и специфичность определены на уровне 67,6%, 62%, 81% соответственно; для плеврального выпота на уровне 66,7%, 62,5%, 71,4% соответственно; и для интраоперационных смывов на уровне 62,5%, 66,7%, 50% соответственно.

Рис. 4. ROC-кривая для первичного цитологического исследования. А) Общее количество цитологических исследований; Б) Цитологическое исследование асцитической жидкости; В) Цитологическое исследование плеврального выпота; Г) Цитологическое исследование интраоперационных смывов

Fig. 4. ROC curve for primary cytological examination. A) The total number of cytological studies; B) Cytological examination of ascitic fluid; C) Cytological examination of pleural effusion; D) Cytological examination of intraoperative flushes

Полученные данные сопоставимы с показателями оценки эффективности метода, встречающимися в литературе у ряда авторов (В.А. Липова; Mohanty S.K., Dey P. 2003; Motherby H., Nadjari B., Friegel P., et al. 2012). В работах Kipps Е., Tan D.S.P., Kayе S.B (2013) отмечается, что цитологическое исследование экссудатов при раке яичников позволяет дифференцировать злокачественную, инфекционную и воспалительную природу асцита (чувствительность ― 97%). Клеточный компонент асцитической жидкости представлен клетками мезотелия, опухолевыми клетками, клетками гемопоэтического происхождения, при этом отмечается, что эффективность цитологии выше при первичном раке брюшины [25].

Рекомендованная международной классификацией схема двухэтапной диагностики природы экссудата на этапе первичного звена оказания медицинской помощи в условиях хирургических стационаров ограничивается отсутствием необходимого оборудования и малыми потоками исследований в виде отдельных случаев. Используя в нашей работе отечественную тест-систему для ИЦХ-исследования выпотных жидкостей SER-1 (РУ РЗН №2022/17624, ООО «РУССЭЛЛ», Россия), удалось минимизировать количество дополнительных исследований выпотных жидкостей в работе клинико-диагностической лаборатории хирургического стационара.

Так, ИЦХ-исследование с помощью тест-системы в формате биочипа уменьшило число случаев отнесенных к III-V категориям международной классификации. В процентном значении результаты выглядели следующим образом: 39,8% для асцитической жидкости, 26,3% для плеврального выпота и 32,3% для интраоперационных смывов. Преимущественно снижение значений отмечалось за счет уменьшения процента заключений в категориях «атипия неясного значения» и «подозрение на злокачественный процесс».

Рассчитанные показатели эффективности комплексного цитологического и ИЦХ-исследования по данным ROC-анализа (рис. 5а-г) составили:

  • Для общей выборки: точность ― 67,3%, чувствительность ― 57,9%, специфичность ― 88,2%;
  • Для асцитической жидкости: точность ― 67,6%, чувствительность ― 58%, специфичность ― 90,5%;
  • Для плеврального выпота: точность ― 66,7%, чувствительность ― 50%, специфичность ― 85,7%;
  • Для интраоперационного смыва: точность ― 66,7%, чувствительность ― 61,1%, специфичность ― 83,3%.

Рис.5. ROC-кривая для комплексного цитологического и ИЦХ исследования. А) Общее количество цитологических исследований; Б) Цитологическое исследование асцитической жидкости; В) Цитологическое исследование плеврального выпота; Г) Цитологическое исследование интраоперационных смывов

Fig. 5. ROC curve for complex cytological and ICC studies. A) The total number of cytological studies; B) Cytological examination of ascitic fluid; C) Cytological examination of pleural effusion; D) Cytological examination of intraoperative flushes

Анализируя данные (рис. 6.) полученные при первичном цитологическом исследовании экссудатов и эти же показатели при комплексном исследовании с применением тест-системы SER-1, мы наблюдали снижение доли заключений с атипией неясного значения (категория III) более 10% в случае асцитов и интраоперационных смывов, а также на 15% в случае плеврального выпота. Относительно доли неутвердительных заключений (категория IV) отмечается снижение в два и более раз (2,8 раза для асцита, 2,0 для плеврального выпота и 6,1 для интраоперационного смыва). Использование тест-системы SER-1 позволяет повысить выявление злокачественных клеток в экссудатах их серозных полостей в 1,7 и 2,0 раза в случаях асцитической жидкости, а также плеврального выпота и интраоперационного смыва.

Рис. 6. Динамика распределения цитологических заключений по категориям до применения ИЦХ исследования с использованием тест-системы SER-1 и после

Fig. 6. Dynamics of the distribution of cytological conclusions by category before and after the application of the ICC study using the SER-1 test system

При анализе данных исследования К.С. Павлюк, М.Г. Леонов, А.В. Акобян за период 2018-2021 гг. цитологическому исследованию было подвергнуто 10 082 образца выпотных жидкостей серозных полостей (плевральной ― 8 166 (81%), абдоминальной ― 1 512 (15%), перикардиальной ― 404 (4%)) с микроскопическим исследованием традиционных препаратов, а в сложных диагностических случаях дополнительным ИЦХ-исследованием. В результате применение ИЦХ-исследования повышало диагностическую точность цитологического метода с 62 до 93% и специфичность с 95 до 99% [26]. Применение тест-системы SER-1 в практической работе позволяет внедрить минимально необходимый перечень ИЦХ-исследований без формирования больших потоков пациентов, а также способствует унифицированию и повышению точности результатов цитологического исследования в рамках международной классификации.

Заключение

Цитология серозного выпота показывает высокую специфичность и умеренную чувствительность при оценке серозных выпотов. Многоуровневая схема классификации может улучшить согласованность терминологии для представления результатов цитологического исследования, способствуя коммуникации между разными специалистами, что в конечном итоге сказывается на качестве лечения пациентов.

Применение комплексного подхода в виде цитологического и ИЦХ-исследования выпотных жидкостей при РЯ позволяет повысить выявляемость клеток злокачественных опухолей в цитологических образцах в 2,0 раза и снижает долю заключений с атипией неясного значения на 10% и более.

Применение тест-системы SER-1 способствует более точному обнаружению опухолевых клеток в экссудатах из серозных полостей при раке яичников, повышая показатели эффективности цитологического исследования, позволяя выявить заболевания в более короткие сроки в практике хирургических стационаров и ЦАОПов, не имеющих большого потока онкологических пациентов, а также в условиях отсутствия лаборатории, выполняющей ИЦХ.

Финансирование

Исследование не имело спонсорской поддержки.

 Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

 Литература

  1. McCluggage W.G. Morphological subtypes of ovarian carcinoma: a review with emphasis on new developments and pathogenesis // Pathology. ― 2011. ― Vol. 43. ― P. 420-432.
  2. Torre L.A., Trabert B., DeSantis C.E., et al. Ovarian cancer statistics, 2018 // CA Cancer J. Clin. ― 2018. ― Jul. ― 68 (4). ― P. 284-296. doi: 10.3322/caac.21456. Epub 2018 May 29. PMID: 29809280; PMCID: PMC6621554
  3. Siegel R.L., Miller K.D., Jemal A. Cancer statistics, 2020 // CA Cancer J. Clin. ― 2020. ― 70. ― P. 7-30.
  4. Wei W., Li N., Sun Y., et al. Clinical outcome and prognostic factors of patients with early-stage epithelial ovarian cancer // Oncotarget. ― 2017. ― 8 (14). ― P. 23862-70. https://doi.org/10.18632/oncotarget.13317
  5. Борисова О.В. Современные возможности цитологического метода в исследовании плевральных и перитонеальных экссудатов: дисс. … канд. мед. наук. ― М., 2010. ― 149 с.
  6. Григорук О.Г., Лазарев А.Ф., Богатырев В.Н. и др. Дифференциальная диагностика заболеваний плевры на клеточном уровне // Сибирский онкологический журнал. ― 2006. ― №3 (19). ― С. 127-129.
  7. Клюкина Л.Б. Цитологический метод исследования выпотных жидкостей // Онкологический журнал. ― 2012. ― Т. 6, №1. ― С. 79-85.
  8. Лискина И.В. Малоинвазивные хирургические процедуры в диагностическом алгоритме при синдроме плеврального выпота неясного генеза (клинико-морфологические сопоставления) // Український медичний часопис. ― 2005. ― №3 (47). ― C. 25-30.
  9. Переводчикова Н.И., Алексеева Т.Р. Опухолевые плевриты: диагностика и выбор терапевтической тактики // Международный медицинский журнал. ― 2003. ― №4. ― С. 88-93.
  10. Zarogoulidis K., Zarogoulidis P., Darwiche K., et al. Malignant pleural effusion and algorithm management // J. Thorac. Dis. ― 2013. ― Vol. 5. (S4). ― P. 413-419.
  11. Comprehensive Cytopathology. ― Third Edition. ― 2008.
  12. Долгов В.В., Шабалова И.П„ Миронова И.И. и соавт. Выпотные жидкости. Лабораторное исследование. — Москва-Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2006. — 161 с.
  13. Савостикова М.В. Жидкостная цитология и иммуноцитохимическое исследование в цитологической диагностике биологических жидкостей и смывов с брюшины при онкогинекологических заболеваниях // Онкогинекология. — 2013. — №4. — С. 41-55.
  14. Dabbs D.J. Diagnostic immunohistochemistry. — Edinburgh, 2006.
  15. Петров С.В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. — Казань, 2004.
  16. Angelis M. D., Buley I. D., Heryet A., Gray W. // Cytopathology. — 2007. — Vol. 3, №2. — P. 111-127.
  17. Bjorn R., Ben D., Hiep D. // J. Clin. Pathol. — 2000. — Vol. 53, № — P. 513-517.
  18. Risberg B., Davidson B., Dong H. et al. // J. Clin. Pathol. — 2000. — Vol. 53, № — P. 513-517.
  19. Shidham V.B., Atkinson B.F. Cytophathologic diagnosis of serous fluids. — Philadelphia: Saunders Elsevier, 2007.
  20. Волченко Н.Н., Борисова О.В. Роль эпителиального антигена BER-ЕР4 в исследовании экссудата из серозных полостей // Российский онкологический журнал. ― 2012. ― №2. ― С. 18-22.
  21. Виллерт А.Б., Коломиец Л.А., Юнусова Н.В., и др. Асцит как предмет исследований при раке яичников // Сибирский онкологический журнал. ― 2019. ― 18 (1). ― С. 116-123. doi: 10.21294/1814-4861-2019-18-1-116-123
  22. Lazarov N., Lazarov L., Lazarov S. Role of ascites and peritoneal cytology as prognostic factor for a patients with early epithelial ovarian cancer // Trakia Journal of Sciences. ― 2013. ― 11 (4). ― P. 359-361.
  23. Chan J.K., Tian C., Monk B.J., et al. Gynecologic Oncology Group. Prognostic factors for highrisk early-stage epithelial ovarian cancer // Cancer. ― 2008. ― May 15. ― 112 (10). ― P. 2202-10. doi: 10.1002/cncr.23390
  24. Pinto D., Chandra A., Crothers B.A., et al. The international system for reporting serous fluid cytopathology-diagnostic categories and clinical management // J. Am. Soc. Cytopathol. ― ― Nov-Dec. ― 9 (6). ― P. 469-477. doi: 10.1016/j.jasc.2020.05.015. Epub 2020 Jun 9
  25. Kipps Е., Tan D.S.P., Kayе S.B. Meeting the challenge of ascites in ovarian cancer: new avenues for therapy and research // Nat. Rev. ― 2013. ― Apr. ― 13 (4). ― P. 273-82. doi: 10.1038/nrc3432
  26. Павлюк К.С., Леонов М.Г., Акобян А.В., и др. Этапы цитологического исследования (с применением ИЦХ) выпотных жидкостей // Онкология и радиология Казахстана. ― 2022. ― Т. 66, №4. ― С. 33-37. doi: https://www.doi.org/10.52532/2521-6414-2022-4-66-33-37