© М.А. Сеньчукова, Н.В. Никитенко, Е.Ю. Зубарева, 2020
УДК 618.19-006.6-091
1ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет» МЗ РФ, г. Оренбург
2ГБУЗ «Онкологический диспансер №2» Минздрава Краснодарского края, г. Сочи
Сеньчукова Марина Алексеевна ― доктор медицинских наук, профессор кафедры лучевой диагностики, лучевой терапии, онкологии ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет» МЗ РФ; SPIN-код: 9877-8828, Author ID: 583884, ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8371-740X
460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, тел. +7-987-348-85-25, e-mail: masenchukova@yandex.ru
Реферат
Виментин ― белок промежуточных филаментов тканей мезодермального происхождения, известен также как один из маркеров эпителиально-мезенхимальной трансформации.
Цель исследования ― изучить особенности экспрессии виментина и их корреляции с разными типами опухолевых сосудов и клиническими характеристиками рака молочной железы.
Материал и методы. В ретроспективное исследование «случай-контроль» были включены образцы опухолей, полученные от 63 пациентов с T1-2N0-3M0 стадиями инвазивного РМЖ неспецифического типа. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и иммуногистохимически с использованием антител к CD34 и виментину. Статистическую обработку результатов исследования выполняли с использованием программы Statistica 6.
Результаты. Экспрессия виментина была выявлена в следующих типах клеток: в нормальных фибробластах и миоэпителиальных клетках, эндотелиальных клетках, полиморфных стромальных клетках и в клетках внутрипротокового и инвазивного РМЖ. Высокая плотность (14,4 и более в поле зрения) полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, и наличие экспрессии виментина в инвазивном компоненте опухоли чаще наблюдалась при множественных структурах с частичной эндотелиальной выстилкой (р=0,008 и р=0,007, соответственно) и множественных дилятированных капиллярах с хаотичной эндотелиальной выстилкой (р=0,0003 и р=0,0003, соответственно). Не выявлено корреляций между особенностями экспрессии виментина и клиническими, патологическими и молекулярно-биологическими характеристиками РМЖ.
Заключение. Полученные данные подтверждают гипотезу о связи процессов ангиогенеза и ЭМТ при РМЖ.
Ключевые слова: ангиогенез, виментин, рак молочной железы, эпителиально-мезенхимальная трансформация.
Вступление
Согласно современным представлениям, ангиогенез и эпителиально-мезенхимальной трансформации (ЭМТ) являются ключевыми факторами опухолевой прогрессии, которые непосредственно связанны с инвазивным ростом и метастазированием злокачественных новообразований. ЭМТ представляет собой сложный процесс, в результате которого неподвижные поляризованные эпителиальные клетки приобретают фенотип подвижных мезенхимальных клеток. Этот процесс может наблюдаться как при физиологических состояниях, так и при патологии [1, 2]. Полагают, что основная функция этого процесса связана со стромообразованием, необходимым для органогенеза, процессов заживления, а также роста злокачественных новообразований. Установлено, что при злокачественных опухолях индукция ЭМТ может способствовать инвазии, распространению и метастазированию опухолевых клеток и, следовательно, являться одним из основных механизмов опухолевой прогрессии [3].
Важным фенотипическим признаком ЭMT является экспрессия виментина опухолевыми клетками. Виментин представляет собой белок промежуточных филаментов соединительной ткани и других тканей мезодермального происхождения. Он, наряду с микротрубочками и актином, участвует в конструировании цитоскелета [4, 5]. В ряде исследований была отмечена связь экспрессии виментина опухолевыми клетками с недифференцированными опухолями, высоким риском рецидива заболевания и снижением выживаемости [6, 7].
Следует отметить, что, несмотря на тот факт, что ангиогенез и ЭMT активируются одними и теми же факторами опухолевого микроокружения [8], в научной литературе недостаточно информации о том, какие типы опухолевых сосудов связаны с процессами ЭMT, а какие нет. Учитывая, что оценка выраженности экспрессии виментина может быть использована для диагностики ЭМТ, целью настоящего исследования явилось изучение особенностей экспрессии виментина и их корреляций с различными типами опухолевых сосудов и клиническими характеристиками рака молочной железы (РМЖ).
Материал и методы
Пациенты
Ретроспективное исследование «случай-контроль» было одобрено Этическим комитетом ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации. В исследование были включены образцы опухолей, полученные от 63 пациентов с T1-2N0-3M0 стадиями инвазивного РМЖ неспецифического типа, которым с мая 2011 года по апрель 2013 года в ГБУЗ «Оренбургский областной онкологический диспансер» (ООКОД) была выполнена радикальная операция в объеме радикальной мастэктомии или радикальной резекции молочной железы. Ни одна из пациенток, включенных в исследование, не получала до операции неоадьювантную химиотерапию или лучевую терапию, не имела предшествующих злокачественных новообразований в анамнезе и выраженной сопутствующей патологии. Данные о возрасте пациенток, стадии заболевания, размере и степени дифференцировки опухоли, экспрессии в опухоли рецепторов эстрогенов (РЭ) и прогестерона (РП), пролиферативной активности опухолевых клеток и статусе HER-2, отдаленных результатах лечения были получены из амбулаторных карт пациентов и канцер-регистра.
Гистологические и иммуногистохимические исследования
Из архивных парафиновых блоков операционного материала готовили срезы толщиной 3–4 мкм и окрашивали гематоксилином Майера и эозином и иммуногистохимическим методом (ИГХ) с использованием антител к CD34 (QB-END/10, Novocastra Laboratories Ltd.) в разведении 1:50 и виментину (клон Vim 3B4, DAKO, Carpinteria, США) в разведении 1:100. Исследование проводили в соответствии с протоколом фирмы-изготовителя на базе ИГХ-лаборатории ГБУЗ ООКОД, оснащенной роботизированной системой Autostainer 480. Срезы наносили на высокоадгезивные стекла и высушивали при температуре 37°С в течение 18 ч. В качестве системы визуализации применяли UltraVision LP Detection System HRP Polymer & DAB Plus Chromogen. В качестве отрицательного контроля срезы аналогичным образом инкубировали с раствором для разведения антител (UltrAb Diluent). Препараты изучали с помощью с помощью цифрового микроскопа Levenhuk D740T, 5,1 Мпикс (ОАО «Левенгук», Санкт-Петербург, Россия).
В исследуемых образцах оценивали следующие показатели:
― Плотность полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, оценивали на участках с максимальной плотностью клеток (так называемые «горячие точки»), путем подсчета среднего количества клеток на условную единицу площади (УЕП). Сначала образцы исследовали при увеличении х200, выявляли по 5 участков с максимальной плотностью клеток и затем при увеличении х400 выполняли снимки выбранных объектов. Подсчет клеток проводили на мониторе компьютера с использованием программного обеспечения Adobe Photoshop в ручном режиме с наложением на изображение метрической сетки плотностью 140 точек. Диаметр микроскопического поля, используемого для подсчета клеток, составлял 0,44 мм. Для дальнейшего анализа все случаи были стратифицированы на две группы: с высокой и низкой плотностью полиморфных стромальных клеток (больше или равно 14,4 клетки и менее 14,4 клетки в поле зрения, соответственно). Для стратификации по группам использовали 65-й процентиль;
― Наличие экспрессии виментина в клетках интрадуктального и инвазивного компонентов опухоли оценивали полуколичественным способом (есть, нет);
― Плотность микрососудов (ПМС), количество дилятированных капилляров (ДК), атипичных расширенных капилляров (АДК) ― сосудов неправильной формы с хаотическим расположением эндотелиальных клеток, «структур с частичной эндотелиальной выстилкой» и «ячеистых структур» в рыхлой неоформленной соединительной ткани перитуморальной стромы оценивали как было описано ранее [9];
― Лимфоваскулярная инвазия была оценена полуколичественным способом (есть, нет).
Оценка описанных выше показателей проводилась двумя исследователями (СМА и ННВ) без знания клинических и патологических данных.
Статистика
Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения Statistica 6.0. ПМС и плотность полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, выражали как среднее значение ± стандартное отклонение. Корреляции между показателями устанавливали с использованием непараметрической ранговой корреляции Спирмена или гамма-корреляции. Для сравнения значений средних использовали непараметрические тесты Крускала ― Уоллиса и Манна ― Уитни. Сравнение частот признака в группах выполняли с использованием теста χ2. Значение P <0,05 считалось статистически значимым.
Результаты
В таблице 1 обобщены клинико-патологические данные пациенток с РМЖ. Средний возраст пациенток составил 57,6±8,9 года (от 35 до 75 лет, медиана ― 57 лет). Радикальная мастэктомия была выполнена 49 пациенткам, радикальная резекция молочной железы ― 14. Количество удаленных подмышечных лимфоузлов составило 14,3±2,7 (от 10 до 21 лимфоузлов). Средний период наблюдения за пациентками равнялся 55 месяцам.
Таблица 1. Клинико-морфологическая характеристика случаев рака молочной железы
Table 1. Clinical and morphological characteristics of cases of breast cancer
|
Показатели |
n (%) |
|
Возраст |
|
|
<50 |
11 (17,5) |
|
>50 |
52 (82,5) |
|
Т стадия |
|
|
pT1 |
26 (58,7) |
|
pT2 |
37 (41,3) |
|
N стадия |
|
|
pN0 |
37 (58,7) |
|
pN1 |
15 (23,9) |
|
pN2 |
1 (1,5) |
|
pN3 |
10 (15,9) |
|
Степень дифференцировки опухоли |
|
|
G1 |
8 (12,7) |
|
G2 |
43 (68,3) |
|
G3 |
12 (19,0) |
|
Статус рецепторов к эстрагенам |
|
|
Негативный |
34 (53,9) |
|
Позитивный |
29 (46,1) |
|
Статус рецепторов к прогестерону |
|
|
Негативный |
45 (71,4) |
|
Позитивный |
18 (28,6) |
|
HER2/neu статус |
|
|
Негативный |
50 (79,4) |
|
Позитивный |
13 (20,6) |
При анализе гистопрепаратом экспрессия виментина была выявлена в следующих типах клеток (рис. 1):
1. Обычные фибробласты и миоэпителиальные клетки. Эти клетки обычно располагались вдоль волокон соединительной ткани или базальных мембран нормальных и опухолевых желез. Они визуализировались как вытянутые клетки, часто изогнутой формы (рис. 1А). Экспрессия виментина в них была однородной, слабой или умеренной интенсивности.
2. Эндотелиальные клетки. Клетки эндотелиальной выстилки равномерно окрашивались маркером и имели четкие, ровные контуры (рис. 1B). В некоторых сосудах эндотелиальные клетки располагались хаотично, неравномерно накапливали маркер и имели нечеткие контуры. Полагаем, что эти сосуды имели отношение к описанным нами ранее АДК [9].
3. Полиморфные стромальные клетки. Наиболее высокая плотность описанных клеток отмечалась в перитуморальной строме. Клетки располагались хаотично, имели крупные гиперхромные ядра разного размера и формы (рис. 1C). Цитоплазма клеток интенсивно окрашивалась виметином. Контуры клеток были нечеткими. Их скопления часто наблюдались рядом со структурами с частичной эндотелиальной выстилкой (рис. 1D).
4. В ряде случаев была отмечена экспрессия виментина в клетках интрадуктального компонента опухоли. Опухолевые клетки, экспрессирующие виментин, имели крупные светлые ядра неправильной формы с неравномерным распределением хроматина. Тонкий ободок цитоплазмы интенсивно окрашивался виментином (рис. 1E).
5. Экспрессия виментина иногда наблюдалась в клетках инвазивного компонента опухоли. Эти клетки имели неправильную форму и интенсивно накапливали виментин (рис. 1F).
Корреляционный анализ по Спирмену (ρ) и гамма-корреляционный анализ (гамма) показали, что при РМЖ только плотность хаотично расположенных клеток перитуморальной стромы и наличие экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли были связаны с особенностями ангиогенеза. Плотность описанных стромальных клеток коррелировала с количеством ДК (гамма=0,500, р=0,002), количеством АДК (гамма=0,791, Р<0,0001), количеством структур с частичной эндотелиальной выстилкой (гамма=0,658, р<0,0001), а также с наличием экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли (гамма=0,648, р<0,0001). Высокая плотность полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, чаще наблюдалась при множественных ДК, АДК и структурах с частичной эндотелиальной выстилкой, а также при наличии экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли (табл. 2). В свою очередь, наличие экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли коррелировало с количеством АДК (гамма=0,800, р<0,0001) и структур с частичной эндотелиальной выстилкой (гамма=0,618, р<0,0001). Экспрессия виментина в клетках инвазивного компонента опухоли чаще наблюдалась у пациентов с множественными АДК и структурами с частичной эндотелиальной выстилкой (табл. 3). Также была отмечена связь экспрессии виментина во внутрипротоковом компоненте опухоли с возрастом пациенток (ρ=-0,489, р=0,0002). При наличии экспрессии виментина во внутрипротоковом компоненте опухоли пациентки были моложе (53,4±12,1 и 60,6±7,5 лет соответственно при наличии и отсутствии экспрессии виментина, р=0,001).
Рис. 1. Особенности экспрессии виментина при раке молочной железы:
А. Экспрессия виментина в обычных фибробластах и миоэпителиальных клетках (x400); B. Экспрессия виментина в клетках эндотелиальной выстилки (x400); C. Экспрессия виментина в полиморфных стромальных клетках (x400); D. Кластеры полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, рядом со структурой с частичной эндотелиальной выстилкой (x200); E. Экспрессия виментина в клетках интрадуктального компонента опухоли (x400); F. Экспрессия виментина в клетках инвазивного компонента опухоли (x400); Иммуногистохимическая окраска с антителами к виментину.
Не установлено корреляций особенностей экспрессии виментина с ПМС в опухоли, клиническими, морфологическими, молекулярно-биологическими подтипами РМЖ и отдаленными результатами лечения.
Таблица 2. Плотность полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, в зависимости от клинико-морфологических и молекулярно-биологических характеристик рака молочной железы, количества разных типов опухолевых сосудов и наличия рецидива заболевания
|
Показатели |
Плотность полиморфных стромальных клеток |
||
|
Низкая n (%) |
Высокая n (%) |
p |
|
|
Возраст |
|
|
0,874 |
|
<50 |
6 (54,5) |
5 (45,5) |
|
|
>50 |
27 (51,9) |
25 (48,1) |
|
|
Т стадия |
|
|
0,846 |
|
pT1 |
19 (51,3) |
18 (48,7) |
|
|
pT2 |
14 (53,8) |
12 (46,2) |
|
|
N стадия |
|
|
0,347 |
|
pN0 |
20 (54,1) |
17 (45,9) |
|
|
pN1 |
9 (60,0) |
6 (40,0) |
|
|
pN2 |
1 (100,0) |
0 (0) |
|
|
pN3 |
3 (30,0) |
7 (70,0) |
|
|
Степень дифференцировки опухоли |
|
|
0,100 |
|
G1 |
7 (87,5) |
1 (12,5) |
|
|
G2 |
20 (46,5) |
23 (53,5) |
|
|
G3 |
6 (50,0) |
6 (50,0) |
|
|
Статус рецепторов к эстрогенам |
|
|
0,150 |
|
Негативный |
15 (44,1) |
19 (55,9) |
|
|
Позитивный |
18 (62,1) |
11 (37,9) |
|
|
Статус рецепторов к прогестерону |
|
|
0,380 |
|
Негативный |
22 (48,9) |
23 (51,1) |
|
|
Позитивный |
11 (61,1) |
7 (38,9) |
|
|
HER2/neu статус |
|
|
0,905 |
|
Негативный |
26 (52,0) |
24 (48,0) |
|
|
Позитивный |
7 (53,8) |
6 (46,2) |
|
|
Плотность микрососудов |
10,1±2,6 |
10,2±3,5 |
0,956 |
|
Количество ДК |
|
|
0,035 |
|
Нет, единичные |
23 (63,9) |
13 (36,1) |
|
|
Множественные |
10 (37,1) |
17 (62,9) |
|
|
Количество структур с частичной эндотелиальной выстилкой |
|
|
0,008 |
|
Нет, единичные |
26 (66,7) |
13 (33,3) |
|
|
Множественные |
7 (29,2) |
17 (70,8) |
|
|
Количество АДК |
|
|
0,0003 |
|
Нет, единичные |
25 (75,8) |
8 (24,2) |
|
|
Множественные |
8 (26,7) |
22 (73,3) |
|
|
«Ячеистые структуры» в рыхлой неоформленной соединительной ткани |
|
|
0,572 |
|
Нет |
12 (48,0) |
13 (52,0) |
|
|
Есть |
21 (55,3) |
17 (44,7) |
|
|
Экспрессия виментина в клетка инвазивного компонента опухоли |
|
|
0,004 |
|
Нет |
25 (67,6) |
12 (32,4) |
|
|
Есть |
8 (30,8) |
18 (69,2) |
|
|
Рецидив рака молочной железы |
|
|
0,18 |
|
Нет |
31 (55,4) |
25 (44,6) |
|
|
Есть |
2 (28,6) |
5 (71,4) |
|
Таблица 3. Наличие экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли в зависимости от клинико-морфологических и молекулярно-биологических характеристик рака молочной железы, количества разных типов опухолевых сосудов и наличия рецидива заболевания
|
Показатели |
Наличие экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли |
||
|
Нет n (%) |
Есть n (%) |
p |
|
|
Возраст |
|
|
0,097 |
|
<50 |
4 (36,4) |
7 (63,6) |
|
|
>50 |
33 (63,5) |
19 (36,5) |
|
|
T стадия |
|
|
0,704 |
|
pT1 |
21 (56,8) |
16 (43,2) |
|
|
pT2 |
16 (61,5) |
10 (38,5) |
|
|
N стадия |
|
|
0,597 |
|
pN0 |
21 (56,8) |
16 (43,2) |
|
|
pN1 |
10 (66,7) |
5 (33,3) |
|
|
pN2 |
0 (0) |
1 (100,0) |
|
|
pN3 |
6 (60,0) |
4 (40,0) |
|
|
Степень дифференцировки опухоли |
|
|
0,100 |
|
G1 |
6 (75,0) |
2 (25,0) |
|
|
G2 |
26 (60,5) |
17 (39,5) |
|
|
G3 |
5 (41,7) |
7 (58,3) |
|
|
Статус рецепторов к эстрогенам |
|
|
0,150 |
|
Негативный |
17 (50,0) |
17 (50,0) |
|
|
Позитивный |
20 (68,9) |
9 (31,1) |
|
|
Статус рецепторов к прогестерону |
|
|
0,380 |
|
Негативный |
26 (57,8) |
19 (42,2) |
|
|
Позитивный |
11 (61,1) |
7 (38,9) |
|
|
HER2/neu статус |
|
|
0,905 |
|
Негативный |
30 (60,0) |
20 (40,0) |
|
|
Позитивный |
7 (53,8) |
6 (46,2) |
|
|
Плотность микрососудов |
10,4±3,1 |
10,0±3,1 |
0,579 |
|
Количество ДК |
|
|
0,941 |
|
Нет, единичные |
21 (58,3) |
16 (41,7) |
|
|
Множественные |
16 (59,3) |
11 (40,7) |
|
|
Количество структур с частичной эндотелиальной выстилкой |
|
|
0,007 |
|
Нет, единичные |
26 (71,8) |
11 (28,2) |
|
|
Множественные |
9 (57,5) |
15 (42,6) |
|
|
Количество АДК |
|
|
0,0003 |
|
Нет, единичные |
27 (81,8) |
6 (18,2) |
|
|
Множественные |
10 (33,3) |
20 (66,7) |
|
|
«Ячеистые структуры» в рыхлой неоформленной соединительной ткани |
|
|
0,491 |
|
Нет |
16 (64,0) |
9 (36,0) |
|
|
Есть |
21 (55,3) |
17 (44,7) |
|
|
Экспрессия виментина в клетках внутрипротокового компонента |
|
|
0,518 |
|
Нет |
27 (61,4) |
17 (38,6) |
|
|
Есть |
10 (52,6) |
9 (47,3) |
|
|
Рецидив рака молочной железы |
|
|
0,37 |
|
Нет |
34 (60,7) |
22 (39,3) |
|
|
Есть |
3 (42,9) |
4 (57,1) |
|
Обсуждение
Ангиогенез является ключевым фактором в развитии опухоли, напрямую связанным с инвазивным ростом и метастазированием злокачественных опухолей [10]. Мы полагаем, что при изучении роли ангиогенеза в развитии опухоли следует учитывать, что сосуды опухоли неоднородны и различаются по происхождению, морфологии и клинической значимости [10-12], в том числе и при РМЖ [9, 13]. Так, ранее при РМЖ в ткани опухоли нами описаны нормальные микрососуды, ДК, АДК (сосуды неправильной формы с хаотическим расположением эндотелиальных клеток), структуры с частичной эндотелиальной выстилкой и «ячеистые структуры» в рыхлой неоформленной соединительной ткани перитуморальной стромы. Было установлено, что АДК и структуры с частичной эндотелиальной выстилкой коррелируют с наличием опухолевых эмболов в сосудах и отрицательным статусом рецепторов к РЭ и РП, тогда как «ячеистые структуры» в рыхлой неоформленной соединительной ткани перитуморальной стромы ― с положительным Her2 статусом и наличием опухолевых эмболов в сосудах [9, 13].
Другим критическим процессом в метастатическом каскаде является ЭМТ [3, 14, 15]. ЭМТ ― это процесс, посредством которого эпителиальные клетки теряют полярность и приобретают миграционные свойства мезенхимальных клеток [1, 2]. Известно, что в опухолевых клетках изменение эпителиального фенотипа на мезенхимальный приводит к повышению уровней маркеров Slug, виментина, β-Catenin, Snail и ядерного фактора-Каппаß (NF-kappaß), что способствует активации ангиогенеза, инвазии и метастазированию опухолевых клеток [1, 3, 8]. Установлено, что при РМЖ экспрессия маркеров ЭМТ связана с местно-распространенными стадиями заболевания, высокой степенью злокачественности опухоли, высоким индексом пролиферативной активности опухолевых клеток Ki-67, наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах и снижением 5-летней выживаемости [8, 15].
Следует отметить, что виментин является одним из широко известных фенотипических маркеров ЭМТ. Установлено, что его экспрессия в опухолевых клетках может быть опосредована передачей сигналов NF-kappaß или TGF-бета [16]. При колоректальном раке [6], раке пищевода и желудка [7], меланоме [17] и раке легкого [18] экспрессия виментина в опухолевых клетках была связана с высоким риском рецидива заболевания и снижением выживаемости. При РМЖ экспрессия виментина была связана с метастазами в регионарные лимфатические узлы и со снижением общей и безрецидивной выживаемостью [19].
Важно подчеркнуть, что многочисленные исследования указывают на то, что процессы ангиогенеза и ЭМТ активируются одними и теми же факторами микроокружения опухоли [8, 20, 21]. Однако в настоящее время неясно, какие типы сосудов участвуют в процессы ЭМТ и метастазирования, а какие нет, и посредством каких механизмов. В связи с этим, изучение взаимосвязей ключевых маркеров ЭМТ с различными типами опухолевых сосудов представляет несомненный интерес.
В этой работе мы исследовали особенности экспрессии виментина в опухолевых и стромальных клетках и их корреляции с количеством разных типов опухолевых сосудов, стадией заболевания, наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах, статусом РЭ, РП и HER2, наличием лимфоваскулярной инвазии и рецидива заболевания. Следует отметить, что мы не обнаружили каких-либо корреляций между особенностями экспрессии виментина и клинико-морфологическими характеристиками и молекулярно-биологическими подтипами РМЖ. Мы полагаем, что это может быть связано с тем, что в исследование были включены пациенты только с Т1-Т2 стадиями РМЖ с относительно благоприятным прогнозом заболевания. В течение периода наблюдения только у 7 пациенток был выявлен рецидив РМЖ. В этой группе высокая плотность полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, встречалась чаще, чем в группе без рецидивов (в 71,4 и 44,6% случаев, соответственно, при отсутствии и наличии рецидивов, р=0,18), но эти результаты статистически недостоверны.
Несмотря на то, что не было никаких существенных корреляций между особенностями экспрессии виментина и клинико-морфологическими факторами прогноза РМЖ, это исследование показало, что экспрессия виментина в хаотично расположенных клетках перитуморальной стромы и в клетках инвазивного компонента опухоли положительно коррелируют между собой и с некоторыми типами опухолевых сосудов. Высокая плотность полиморфных стромальных клеток, экспрессирующих виментин, и наличие экспрессии виментина в клетках инвазивного компонента опухоли чаще наблюдалась при множественных АДК (р=0,0003 и р=0,0003 соответственно) и структурах с частичной эндотелиальной выстилкой (р=0,008 и р=0,007 соответственно). Описанные полиморфные стромальные клетки, экспрессирующие виментин, значительно отличались от нормальных фибробластов. Они имели неправильную форму, нечеткие контуры и светлые ядра с выраженным полиморфизмом. Можно предположить, что эти клетки имеют отношение к опухоль-ассоциированным фибробластам. В то же время, что немаловажно, их происхождение может быть связано с ЭМТ опухолевых клеток.
Важно отметить, что строма опухоли, представленная различными клетками, включая иммунные, эндотелиальные, мышечные, нервные клетки, фибробласты, а также внеклеточный матрикс, играет решающую роль в опухолевой прогрессии [22]. Стромальные клетки, продуцируя различные медиаторы роста и пролиферации, участвуют в активации процессов ангиогенеза и ЭМТ [23, 24]. Увеличение агрессивности опухоли сопровождается увеличением экспрессии фибробласт-ассоциированных маркеров, таких как тенасцин [25], трансформирующего фактора роста-β [14] и виментин [19, 26]. Эти изменения коррелируют со степенью злокачественности опухоли, стадией и прогнозом заболевания.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что уровень экспрессии виментина в опухолевой строме коррелирует с количеством АДК и структур с частичной эндотелиальной выстилкой, которые, как было показано ранее [9, 13], коррелируют с отрицательным статусом рецепторов эстрогенов и прогестерона. Учитывая тот факт, что виментин в настоящее время рассматривается как один из многообещающих целей противоопухолевой терапии [27-30], дальнейшие исследования взаимосвязей между экспрессией маркеров ЭМТ, ангиогенезом, клинико-морфологическими и молекулярно-биологическими характеристиками РМЖ представляют несомненный интерес.
Литература
- Lamouille S., Xu J., Derynck R. Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition // Nat. Rev. Mol Cell Biol. ― 2014 Mar. ― 15 (3). ― P. 178-96.
- Stone R.C., Pastar I., Ojeh N., et al. Epithelial-mesenchymal transition in tissue repair and fibrosis // Cell Tissue Res. ― 2016 Sep. ― 365 (3). ― P. 495-506.
- Liao T.T., Yang M.H. Revisiting epithelial-mesenchymal transition in cancer metastasis: the connection between epithelial plasticity and stemness // Mol Oncol. ― 2017 Jul. ― 11 (7). ― P. 792-804.
- Jiu Y., Lehtimäki J., Tojkander S., et al. Bidirectional Interplay between Vimentin Intermediate Filaments and Contractile Actin Stress Fibers // Cell Rep. ― 2015 Jun 16. ― 11 (10). ― P. 1511-8.
- Sharma P., Bolten Z.T., Wagner D.R., Hsieh A.H. Deformability of Human Mesenchymal Stem Cells Is Dependent on Vimentin Intermediate Filaments // Ann Biomed Eng. ― 2017 May. ― 45 (5). ― P. 1365-1374.
- Lazarova D.L., Bordonaro M. Vimentin, colon cancer progression and resistance to butyrate and other HDACis // J. Cell. Mol. Med. ― 2016. ― 20. ― P. 989-993.
- Brzozowa M., Wyrobiec G., Kołodziej I., et al. The aberrant overexpression of vimentin is linked to a more aggressive status in tumours of the gastrointestinal tract // Gastroenterol. Rev. ― 2015. ― 1. ― P. 7-11.
- Luo M., Hou L., Li J., et al. VEGF/NRP-1axis promotes progression of breast cancer via enhancement of epithelial-mesenchymal transition and activation of NF-κB and β-catenin // Cancer Lett. ― 2016 Apr 1. ― 373 (1). ― P. 1-11.
- Никитенко Н.В., Сеньчукова М.А., Томчук О.Н., и др. Морфологическая характеристика и прогностическое значение разных типов сосудов при раке молочной железы // Российский биотерапевтический журнал. ― 2016. ― 3. ― С. 15-22.
- Спринджук М.В. Ангиогенез и цифровая патология // Поволжский онкологический вестник. ― 2012. ― С. 7-14.
- Dvorak H.F. Tumor Stroma, Tumor Blood Vessels, and Antiangiogenesis Therapy // Cancer J. ― 2015 Jul-Aug. ― 21 (4). ― P. 237-43.
- Maishi N., Annan D.A., Kikuchi H., et al. Tumor Endothelial Heterogeneity in Cancer Progression // Cancers (Basel). ― 2019 Oct 9. ― 11 (10). ― pii: E1511.
- Senchukova M.A., Nikitenko N.V., Tomchuk O.N., et al. Different types of tumor vessels in breast cancer: morphology and clinical value // Springer plus. ― 2015. ― 4. ― P. 512.
- Li H., Xu F., Li S., et al. The tumor microenvironment: An irreplaceable element of tumor budding and epithelial-mesenchymal transition-mediated cancer metastasis // Cell Adh Migr. ― 2016 Jul 3. ― 10 (4). ― P. 434-46.
- Bae Y.K., Choi J.E., Kang S.H., Lee S.J. Epithelial-Mesenchymal Transition Phenotype Is Associated with Clinicopathological Factors That Indicate Aggressive Biological Behavior and Poor Clinical Outcomes in Invasive Breast Cancer // J. Breast Cancer. ― 2015. ― 18 (3). ― P. 256-263.
- Zhou H., Xu J., Zhang C., Wen Y. Aberrant histone deacetylase 1 expression upregulates vimentin expression via an NF-κB-dependent pathway in hepatocellular carcinoma // Oncol Lett. ― 2019 Jul. ― 18 (1). ― P. 339-347.
- Li M., Zhang B., Sun B., et al. A novel function for vimentin: the potential biomarker for predicting melanoma hematogenous metastasis // J. Exp. Clin. Cancer Res. ― 2010 Aug 11. ― 29. ― P. 109.
- Dauphin M., Barbe C., Lemaire S., et al. Vimentin expression predicts the occurrence of metastases in non small cell lung carcinomas // Lung Cancer. ― 2013. ― 81. ― P. 117-122.
- Yamashita N., Tokunaga E., Iimori M., et al. Epithelial Paradox: Clinical Significance of Coexpression of E-cadherin and Vimentin With Regard to Invasion and Metastasis of Breast Cancer // Clin Breast Cancer. ― 2018 Oct. ― 18 (5). ― P. e1003-e1009.
- Wang M., Yan J., Cao X., et al. Hydrogen sulfide modulates epithelial-mesenchymal transition and angiogenesis in non-small cell lung cancer via HIF-1α activation // Biochem Pharmacol. ― 2019 Dec 20. ― 172. ― P. 113775.
- Wang Z., Perez M., Lee E.S., et al. The functional relationship between transglutaminase 2 and transforming growth factor β1 in the regulation of angiogenesis and endothelial-mesenchymal transition // Cell Death Dis. ― 2017 Sep 7. ― 8 (9). ― P. e3032.
- Arneth B. Tumor Microenvironment // Medicina (Kaunas). ― 2019 Dec 30. ― 56 (1).
- Liu T., Zhou L., Li D., et al. Cancer-Associated Fibroblasts Build and Secure the Tumor Microenvironment // Front Cell Dev Biol. ― 2019 Apr 24. ― 7. ― 60.
- Wen S., Hou Y., Fu L., et al. Cancer-associated fibroblast (CAF)-derived IL32 promotes breast cancer cell invasion and metastasis via integrin β3-p38 MAPK signalling // Cancer Lett. ― 2019 Feb 1. ― 442. ― P. 320-332.
- Ni W.D., Yang Z.T., Cui C.A., et al. Tenascin-C is a potential cancer-associated fibroblasts marker and predicts poor prognosis in prostate cancer // Biochem Biophys Res Commun. ― 2017 May 6. ― 486 (3). ― P. 607-612.
- Liu L.G., Yan X.B., Xie R.T., et al. Stromal Expression of Vimentin Predicts the Clinical Outcome of Stage II Colorectal Cancer for High-Risk Patients // Med. Sci Monit. ― 2017. ― 23. ― P. 2897-2905.
- Strouhalova K., Přechová M., Gandalovičová A., et al. Vimentin Intermediate Filaments as Potential Target for Cancer Treatment // Cancers (Basel). ― 2020 Jan 11. ― 12 (1).
- Wang W., Yi M., Zhang R., et al. Vimentin is a crucial target for anti-metastasis therapy of nasopharyngeal carcinoma // Mol Cell Biochem. ― 2018 Jan. ― 438 (1-2). ― P. 47-57.
- Bollong M.J., Pietilä M., Pearson A.D., et al. A vimentin binding small molecule leads to mitotic disruption in mesenchymal cancers // Proc Natl. Acad. Sci U S A. ― 2017.